Os torcedores no Estádio Allegiant, em Las Vegas, gritaram "puto" - um xingamento homofóbico no espanhol mexicano - quando Matt Turner, o goleiro dos Estados Unidos, recolocou uma bola em jogo.
A partida foi interrompido brevemente enquanto a torcida era advertida.
O xingamento "puto" significa "prostituto", mas no México é traduzido como "bicha" e é amplamente usado para insultar alguém.
O cântico há muito tempo é um problema para a Federação Mexicana de Futebol (FMF), que foi multada em várias ocasiões e que já pediu aos torcedores que parassem com a prática.
A CONCACAF emitiu uma declaração após o jogo, dizendo que "condenava veementemente" o que chamou de "cantos discriminatórios".
"Os cantos ouvidos durante o jogo levaram à ativação do protocolo antidiscriminação pelos árbitros da partida. Além disso, a equipe de segurança expulsou vários torcedores por comportamento inaceitável no estádio", disse a confederação, que rege o futebol nas Américas do Norte e Central e no Caribe.
"Esses incidentes foram extremamente decepcionantes e mancharam o que deveria ter sido uma ocasião positiva para mostrar o futebol de alta qualidade em nossa região", acrescentou o comunicado.
"A Confederação está em processo de apuração urgente de mais detalhes e relatórios dos oficiais de segurança e da partida e fará uma nova declaração em breve", concluiu.
Os Estados Unidos venceram a partida por 3 a 0.
Reincidência
As várias multas aplicadas ao México ao longo de vários anos totalizam mais de US$ 650 mil e o país foi forçado a jogar sem torcedores contra a Jamaica em setembro de 2021.
A FMF introduziu um sistema de registro de ingressos on-line e QR codes para as partidas realizadas em casa, em uma tentativa de identificar e banir os infratores.
O México será co-sede da Copa do Mundo de 2026 e, no ano passado, o então presidente da federação, Yon de Luisa, advertiu que eles corriam o risco de perder os direitos de sediar a Copa do Mundo por causa do cântico.